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                                 連山變幽晦，綠水函晏溫。

                                 — 出自唐·柳宗元《飲酒》

                                 江城回綠水，花月使人迷。

                                  — 出自唐·李白《襄陽曲四首》

                                 青苔寺里無馬跡，綠水橋邊多酒樓。

                                 — 出自唐·杜牧《潤州二首》

       “綠水”是古今文人騷客慣用的經典意象**，多用來形容山水美景。

         有一種綠水，由淡水水體中藍藻、綠藻、硅藻等大量繁殖引起，名為水華現象。而其中的藍藻會產生一種天然毒素 — 微囊藻毒素（以下簡稱 MC），它具有肝毒性，可能引發腫瘤。不小心誤飲此水，將嚴重威脅人體健康。

微囊藻毒素法規變遷

         飲用水如**暴露于微囊藻毒素下將會對人體健康造成極大威脅，這促使**衛生組織（WHO）發布了 1 μg/L 的臨時指南，以作為飲用水中微囊藻毒素-LG（游離加細胞結合）的*大濃度限值，并且許多**地方政府直接采用了這一準則值。
         隨著近幾年分析技術的不斷**，飲用水安全意識的不斷加強，一些地區出臺了極為嚴格的微囊藻毒素監管標準，尤其是城市供水系統，微囊藻毒素 RR 和 LR 的檢出限均達到了 pg/ml 的濃度級別。
         MC 的傳統分析方法是采用 HPLC 進行紫外檢測，面對如此嚴格的監管標準，雖然可以通過前處理的富集達到相應的檢測濃度水平，但富集過程帶來的操作誤差和人工成本不能忽視。如果采用常規質譜或串聯質譜直接進樣的方式，pg/ml 濃度級別的檢出限會給分析方法帶來極大挑戰。在這種情況下，針對低濃度檢測，On-lineSPE 與質譜的聯用系統脫穎而出。

安捷倫微囊藻毒素分析方法

         安捷倫分別基于 On-line SPE – LC/QQQ  與直接進樣，成功開發了微囊藻毒素（包括 MC-RR，MC-HtyR，MC-LR，MC-HilR， MC-LA 和 MC-LF）的簡單且靈敏的分析方法，這兩種方法均能滿足現今標準要求。

且通過兩種實驗對比得到，On-line SPE 方法不僅省去了耗時且費力的離線 SPE 萃取步驟，其靈敏度還提高了 100 倍以上，可作為未來微囊藻毒素檢測的補充手段。

目標化合物

        MC 是環肽，一般結構是環 [-D-Ala-R2-D-MeAsp-R4-Adda-D-Glu-Mdha-] ，其中 R2 和 R4 是可變的 L-氨基酸（圖 1 和表 1） 。由于擁有兩種可變氨基酸其它氨基酸的甲基化/去甲基化，因此存在多種微囊藻毒素化合物，目前為止已鑒出超過 80 種微囊藻毒素。在本實驗中，選擇其中 6 種*流行的 MC 作為目標化合物。

圖 1. 微囊藻毒素的分子結構式 

表 1. 微囊藻毒素的相關信息

 實驗方法

        On-line SPE 富集和洗脫時閥的位置、On-line SPE – LC/QQQ 方法和直接進樣方法的色譜條件、質譜條件如圖 2 和表 2-4 所示。

圖 2. On-line SPE 富集和洗脫的閥位置

表 2. 直接進樣 LC 采集方法

表 3. On-Line SPE 進樣 LC 采集方法

表4. 質譜采集方法

     分離效果：

      圖 3 顯示了 On-line SPE – LC/QQQ 方法和直接進樣方法進行 MCs 分析所得到的 MRM 色譜圖，[M + 2H] 2+ 被選為 MC-RR 的前體離子，而 [M + H] + 被用作其它 MCs 的前體離子，Agilent Optimizer 軟件對每個離子均進行了參數優化并提供*佳靈敏度。

圖 3. 直接進樣 100 ng/ml（上圖）和 On-line SPE 2 ng/ml（下圖）的 MRM 色譜圖

      線性、定量限和檢出限數據：

      采用直接進樣法，MC-RR 在10 pg/ml - 100 ng/ml 范圍內觀察到良好的檢測器響應線性：

       而使用 On-line SPE 方法：

       由此可得到，On-line SPE 方法可得到更低的定量限和檢出限。

表 5. 兩種進樣方法的定量限和檢測限

      分別在中國四川省成都市區周邊收集了三個地表水樣本，通過 On-line SPE 方法分析得到一個陽性樣本。重要的是，陽性樣品只能通過 On-line SPE 方法量，因為其濃度水平很低。而對于所有測試的 MCs，具有 10μL 進樣體積的直接進樣方法均未能達到檢測限而被檢出。

表 7. 實際樣品的 MCs 檢測結果（ND =未檢測到）

小結

      本文建立了用于定量測定微囊藻毒素（MCs）的簡單且靈敏的方法。使用 Agilent 6470 三重四極桿系統，建立并比較了直接進樣和 On-line SPE 方法。通過對比得到，直接進樣方法獲得的 LOQ 明顯低于 WHO 為 MC-LR 濃度確定的臨時指南值。對于地表飲用水，具有更低 LOQ 的 On-line SPE 方法可滿足*近公布的嚴格的區域供水系統指導值。在實際樣品測試中，MC-RR 和其它微囊藻毒素可從一個地表水樣本中檢測到，且由于其濃度水平較低，只能通過 On-line SPE 方法進行定量。
                                                                                                                                                                                                             文章來源：安捷倫視界